Ультрафильтрациялык центрифуга түтүгүн колдонуу жана сактык чаралары
1) Ылайыктуу ультрафильтрация түтүгүн тандаңыз.Белгилей кетсек, UF мембраналары ар кандай химиялык заттарга чыдамдуулук деңгээли менен айырмаланат.Эреже катары, молекулярдык салмагы 10 кДа кесилген ультра фильтрация түтүктөрүн молекулярдык салмактын кесилиши менен тандаса болот, ал кызыккан протеиндин молекулярдык салмагынын 1/3 бөлүгүнөн ашпоого тийиш, мисалы 35 кДа.Кызыккан белоктун молекулярдык салмагы 10 кд тегерегинде болсо, молекулярдык салмагы 3 КД кесилген ультра фильтрация түтүгүн колдонсо болот.
(2) Жаңы сатылып алынган ультра фильтрация кургак, колдонуудан мурун өтө таза суу кошулуп, мембранадан, муз ваннасынан же муздаткычтан толугу менен өткөн суу бир нече мүнөткө муздатылган.Андан кийин суу куюлат, башкача айтканда, протеин суюктугу жана түтүктүн башындагы ак сызыктан кайсынысы көп эмес, канчасы кошулат.Операция жеңил жана ультра фильтрация түтүгүн протеин эритмесин кошуудан мурун музда алдын ала муздатуу керек.
3) Массасы да, тартылуу борбору да тең салмактуулукка жетиши керек болчу.Айлануу ылдамдыгы жана ылдамдануу өтө тез эмес экенине көңүл буруңуз, антпесе ультра фильтрация мембранасына түздөн-түз зыян келтирет.Центрифугалык ультра фильтрация башталды (центрифуга 4 градуска чейин муздатылган).Ар кандай центрифугалардын RPM ж-га айландырылгандан кийин, ал башкача болгон.Центрифуганын тездетилиши мембранадагы басымды азайтып, минимумга чейин жөнгө салынды.Эскертүү, центрифуга көздөгөн ылдамдыгына жеткенден кийин центрифуганы калтырууну унутпаңыз, же сизде көйгөй пайда болсо, аны биринчи жолу көтөрө албайсыз.Мембрананын шпиндельге багыты көрсөтмөлөргө ылайык туураланган (бурчтук центрифуга корпусу мембрана огуна перпендикуляр).Практикалык колдонууда жалпы айлануу ылдамдыгы инструкциядагыдан төмөн, ошондуктан центрифуга түтүгүнүн иштөө мөөнөтүн узартууга болот.
3) Массасы да, тартылуу борбору да тең салмактуулукка жетиши керек болчу.Айлануу ылдамдыгы жана ылдамдануу өтө тез эмес экенине көңүл буруңуз, антпесе ультра фильтрация мембранасына түздөн-түз зыян келтирет.Центрифугалык ультра фильтрация башталды (центрифуга 4 градуска чейин муздатылган).Ар кандай центрифугалардын RPM ж-га айландырылгандан кийин, ал башкача болгон.Центрифуганын тездетилиши мембранадагы басымды азайтып, минимумга чейин жөнгө салынды.Эскертүү, центрифуга көздөгөн ылдамдыгына жеткенден кийин центрифуганы калтырууну унутпаңыз, же сизде көйгөй пайда болсо, аны биринчи жолу көтөрө албайсыз.Мембрананын шпиндельге багыты көрсөтмөлөргө ылайык туураланган (бурчтук центрифуга корпусу мембрана огуна перпендикуляр).Практикалык колдонууда жалпы айлануу ылдамдыгы инструкциядагыдан төмөн, ошондуктан центрифуга түтүгүнүн иштөө мөөнөтүн узартууга болот.
(4) Калган 1млге концентрацияланганда, 50ул буфердик эритмени алып, 10ул агымды кошуп, ультра фильтрация түтүкчөсүндө протеин жетишпегендигин аныктоо үчүн көк түс бар-жогун көрүңүз.Эгерде түтүк агып кетсе, ультра фильтрациялоону баштоо үчүн үстүнкү катмарды кайра куюп, жаңы түтүккө агыңыз.Түтүктөрдүн өткөрүп жиберилгендигин так аныктоо үчүн, протеиндик клей же Брэдфорд чийки анализи аркылуу агып чыгуунун алдында 5 мгмл BSA менен 10 мүнөт центрифугалап, калган концентрацияланган протеин эритмесин (музда иштейт жана белоктордун ысытуусуна жол бербейт) кошуу менен улантыңыз. бардык концентрат кошулду.Центрифугалоо учурунда протеиндердин чөгүшү пайда болуп, түтүктүн жабылышына алып келсе, сак болуңуз.Эгерде жаан-чачын пайда болсо, жаан-чачындын өзгөчө себеби протеиндин ашыкча концентрациясы же туура эмес буфер экендигин аныктаңыз;Биринчисин бир эле убакта бир нече ультра фильтрациялоочу түтүктөрдү ультра фильтрациялоо, концентрацияны азайтуу, экинчисин белоктун чөкмөлөрү пайда болмоюнча ар кандай буфердик эритмелерди алмаштыруу аркылуу чечсе болот.
(4) Калган 1млге концентрацияланганда, 50ул буфердик эритмени алып, 10ул агымды кошуп, ультра фильтрация түтүкчөсүндө протеин жетишпегендигин аныктоо үчүн көк түс бар-жогун көрүңүз.Эгерде түтүк агып кетсе, ультра фильтрациялоону баштоо үчүн үстүнкү катмарды кайра куюп, жаңы түтүккө агыңыз.Түтүктөрдүн өткөрүп жиберилгендигин так аныктоо үчүн, протеиндик клей же Брэдфорд чийки анализи аркылуу агып чыгуунун алдында 5 мгмл BSA менен 10 мүнөт центрифугалап, калган концентрацияланган протеин эритмесин (музда иштейт жана белоктордун ысытуусуна жол бербейт) кошуу менен улантыңыз. бардык концентрат кошулду.Центрифугалоо учурунда протеиндердин чөгүшү пайда болуп, түтүктүн жабылышына алып келсе, сак болуңуз.Эгерде жаан-чачын пайда болсо, жаан-чачындын өзгөчө себеби протеиндин ашыкча концентрациясы же туура эмес буфер экендигин аныктаңыз;Биринчисин бир эле убакта бир нече ультра фильтрациялоочу түтүктөрдү ультра фильтрациялоо, концентрацияны азайтуу, экинчисин белоктун чөкмөлөрү пайда болмоюнча ар кандай буфердик эритмелерди алмаштыруу аркылуу чечсе болот.
(5) Биринчи бир нече кадамдар протеинди концентрациялоо үчүн колдонулат, жана буферди алмаштыруу керек болсо, акырын жаңы буферди (0,22 м ультра фильтрация мембранасы аркылуу ультра фильтрация) жалпы протеиндин 1 мл жакынына кошуп, үч жолу 1 млге чейин кайра концентраттаңыз. ырааттуу жолу, акыркы концентрацияланган акыркы көлөмү каалаган протеин концентрациясына жараша, жалпысынан 500улдан ашпайт, бирок ошондой эле 200улга чейин.Үч жолу 1000 × же андан көп көрсөткүчкө жетиңиз, бул ар бир жолу кеминде 10 × же андан көп көлөмдү байытуу менен эсептелгендей көп буфер өзгөрөт.
(5) Биринчи бир нече кадамдар протеинди концентрациялоо үчүн колдонулат, жана буферди алмаштыруу керек болсо, акырын жаңы буферди (0,22 м ультра фильтрация мембранасы аркылуу ультра фильтрация) жалпы протеиндин 1 мл жакынына кошуп, үч жолу 1 млге чейин кайра концентраттаңыз. ырааттуу жолу, акыркы концентрацияланган акыркы көлөмү каалаган протеин концентрациясына жараша, жалпысынан 500улдан ашпайт, бирок ошондой эле 200улга чейин.Үч жолу 1000 × же андан көп көрсөткүчкө жетиңиз, бул ар бир жолу кеминде 10 × же андан көп көлөмдү байытуу менен эсептелгендей көп буфер өзгөрөт.
Билдирүү убактысы: 2022-жылдын 09-ноябры